A PCR amplifica uma região de ADN delimitada

Compreender

A reação em cadeia da polimerase, PCR, aumenta o número de cópias de uma região de ADN definida pelos iniciadores. Num ciclo, as duas cadeias separam-se, os iniciadores emparelham com sequências complementares e a polimerase prolonga novas cadeias. Repetir ciclos pode produzir muitas cópias, mas só das regiões para as quais os iniciadores funcionam. A PCR não cria ADN a partir do nada: exige molde, nucleótidos, iniciadores e condições adequadas.

Num modelo ideal em que cada molécula-alvo dá duas cópias completas por ciclo, uma molécula originaria 2, depois 4 e depois 8 cópias em três ciclos. Na prática, a eficiência pode ser inferior, há produtos incompletos no início e o crescimento deixa de ser exponencial indefinidamente. Por isso, 2³=8 é uma previsão didática do modelo, não um resultado laboratorial garantido ou uma medida direta da quantidade inicial.

A interpretação requer controlos: um controlo sem ADN-alvo ajuda a detetar contaminação, e um controlo positivo verifica que a reação consegue funcionar. Um resultado positivo numa amostra não identifica sozinho a origem temporal ou a função biológica da sequência. Antes de tirar conclusões, confere qual região foi amplificada, a qualidade dos controlos e o método de deteção. Esta leção aborda o princípio e a leitura crítica, sem ensinar procedimentos laboratoriais de diagnóstico.